他们开发的通用CAR-T在ASCO耀眼登场，新基因编辑技术或有望解决「脱靶」效应丨医麦黑科技

2017-06-10 16:56:14医麦客

2017年6月5日/医麦客 eMedClub/--近日，在万众瞩目的ASCO年会上，Poseida Therapeutics公司宣布了其一项BCMA-CAR-T研究的临床前数据，Poseida的研究人员利用其公司专有的基因编辑工具NextGEN^TM CRISPR，开发出一种通用的供体CAR-T细胞疗法，这种方式可以有效避免身体的排斥反应和CAR-T细胞的过早耗竭，解决了阻碍“off the shelf”CAR-T细胞疗法发展的两个关键问题。

Poseida Therapeutics是一家位于美国加利福尼亚州、圣地亚哥的生物技术公司，其致力于将最佳的基因编辑技术转化为挽救生命的治疗药物，包括孤儿肝脏疾病治疗和几种类型的免疫肿瘤治疗。

Poseida的基因和细胞治疗项目的核心是基因组工程技术，公司拥有数种行业领先的基因编辑技术：piggyBac Transposon System、NextGEN^TM CRISPR和Footprint-FreeGene Editing，在高度未满足的医疗需求领域开发针对性的治疗药物。

Poseida Therapeutics公司的研发管线

从目前各个研究机构以及CAR-T公司取得的临床试验结果可以看到，自体CAR-T细胞治疗已经成为对抗恶性血液病的高效手段，但是目前自体CAR-T临床应用受限于患者本身的T细胞状态。

对此，Poseida首席执行官Eric Ostertag博士表示：“现在CAR-T细胞产品的获得需要提取患者自身的T细胞，然后经过修饰、纯化，最后回输到个体，这种过程绝对是耗时耗力的，而且成本也比较高。相比较而言，通用供体CAR-T产品的开发可以显著降低成本，同时有可能实现对全球任何血液病和实体瘤患者的治疗。”

另外，自体CAR-T细胞治疗由于免疫抑制肿瘤微环境的存在，针对实体瘤的相关临床进展的并不是很顺利。对此，科学家们正在通过多种基因编辑技术，以寻求解决上述问题的方法。

相比TALEN技术只能用于激活的细胞的使用限制性，CRISPR/Cas9由于可能的脱靶突变也存在着潜在的生产上的安全风险。而且最近《NatureMethods》上发表的一篇只有1页出头的论文发现，在小鼠的体内实验中，CRISPR技术会引入数百种意料外的基因突变。这则爆炸性的研究更是引发了科学家们对CRISPR安全性的关注。

NextGEN^TM CRISPR技术

TALEN、CRISPR/Cas9、NextGEN^TM CRISPR

来源于Poseida官网

Poseida公司的新型的混合基因编辑系统 NextGEN^TM CRISPR就可以在解决脱靶突变的同时克服静息T细胞的编辑限制。其用于开发同种异体CAR-T产品，通过要求同时和空间绑定两个对现场生产性编辑事件至关重要的半站点组件来实现高保真度。

使用NextGEN^TM CRISPR产生的同种异体CAR-T细胞既不反应也不被不匹配的同种异体T细胞排斥，这展示了一个真正的同种异体CAR-T产品的制造。此外，基因编辑的CAR-T细胞完全能够杀死肿瘤细胞，并表现出高度有利的干细胞记忆表型（TSCM），这被认为可能是治疗患者癌症复发的持续控制的关键。

ASCO公布CAR-T试验结果

ASCO年会上，PoseidaTherapeutics公司公布了这项应用NextGEN^TM CRISPR技术针对BCMA抗原的CAR-T试验结果。这项异体基因CAR-T细胞治疗技术应用的是piggyBac以及NextGEN两大技术平台。在使用piggyBac技术转染BCMA-CAR基因的同时，研究者通过NextGEN技术敲除T细胞中介导免疫排斥反应关键基因。

对于获得的BCMA-CAR-T细胞，研究者进行了混合淋巴细胞反应（MLR）以及肿瘤杀伤实验进行了体外评估。此外，研究者利用NextGEN技术进一步进行了CAR-T细胞中多种T细胞关键抑制信号的受体敲除，进一步保证了CAR-T细胞的活化状态。

这种BCMA-CAR-T细胞展现出了令人惊喜的临床前体外实验结果：

NextGEN技术高效敲除了所有的靶基因（TCRα：84%，TCRβ：91%，β-2 microglobulin：64%，表面抑制受体PD-1、CTLA-4、Tim3、Lag-3以及TGFBRII：40-60%）。

更值得注意的是，与CRISPR/Cas9相比，NextGEN技术没有发现脱靶突变效应；在MLR实验中，TCR结构的破坏阻断了MHC I类复合物介导的GVHD反应，完全消除了移植排斥反应；同时TCR以及MHC分子的敲除没有影响CAR-T对BCMA阳性多发性骨髓瘤（Multiple Myeloma，MM）细胞的体外杀伤能力。

Alloreactivity impairs the safety

and long term persistenceof allogeneic CAR-T cells

来源于Poseida官网

高效率：NextGEN^TM CRISPR展示了介导移植物抗宿主（GvH）同种异体反应性和宿主与移植物（HvG）排斥反应的T细胞蛋白以及负责检查点抑制和免疫抑制的的许多受体的高效基因编辑（高达91％）。

高保真度：NextGEN^TM CRISPR的位点特异性靶向受到高度限制，需要在基因靶位点的特定距离内同时结合两个不同指南的两个位点。

消除同种异体反应性：成功破坏介导同种异体反应的关键靶点完全抑制NextGEN^TM CRISPR基因编辑的T细胞的同种异体活性。

强大的功能：敲除关键的同种异体蛋白并没有影响CAR-T细胞杀死肿瘤细胞的能力。

显著的T细胞记忆：超过80％的NextGEN^TM CRISPR基因编辑的CAR-T细胞表现出有利的TSCM表型。这是CAR-T治疗的一个非常理想的特征，因为自我更新多能祖细胞能够重构消除和控制可能的癌症复发所需的全部T细胞亚群。而竞争对手的产品通常的报告只有0-20％的SCM组合。

Poseida首席执行官Eric Ostertag博士

Ostertag博士补充说：“ASCO会议上，我们的研究团队所提供的数据显示了我们的NextGEN^TM CRISPR技术能够安全有效地生产同种异体CAR-T细胞，公司利用一流的基因编辑技术与Poseida的非病毒基因传递系统piggyBac^TM DNA修饰系统相结合，旨在创建公司全资拥有的同种异体CAR-T产品。”