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我国用于氯吡格雷临床基因检测的方法多种多样，但当前临床上药物基因检测项目的开展时间不长，临床质量控制还不完全成熟。本研究旨在通过室间质评结果分析上海地区氯吡格雷临床基因多态性检测现状及存在的问题，为进一步提高和改善临床检测质量提供依据。

通过开展氯吡格雷药物代谢基因——细胞色素P450 2C19(CYP2C19)*2、*3、*17位点检测室间质量评价(简称室间质评)项目,评估参评临床实验室的检测能力及存在的问题。
 

2015年2次室间质评样本盘均分为2组,每组各包含5支样本。要求参评实验室收到样本后在规定时间内检测样本并网上上报检测结果。依据回报结果计算各实验室成绩,汇总不同位点的总体符合率,并分析检测方法和试剂的符合率。

室间质评样本同时采用Sanger双向测序法和聚合酶链反应-芯片杂交法2种方法进行基因型检测。2次室间质评样本盘构成及预期结果见表1。
 

报名参加2015年2次氯吡格雷药物代谢基因检测室间质评计划的实验室分别为18家和20家，在规定时间内收到的有效回报结果分别为16份（上海地区9家，其他地区7家）和17份（上海地区10家，其他地区7家）。各样本实验室检测符合率见表1。

表1 2015年氯吡格雷药物代谢基因检测样本盘构成和实验检测结果

在2次室间质评活动中，实验室利用自配试剂进行检测的比例分别为 37.5%（6/16）和35.3%（6/17）。荧光分子杂交法是最常用的氯吡格雷药物代谢基因检测方法，分别为37.5%（6/16）、41.2%（7/17），其次为Sanger双向测序法，分别为25.0%（4/16）、23.5%（4/17），再次为芯片杂交法，分别为25.0%（4/16）、23.5%（4/17）。见图1。
 

图1  注：（a）参评实验室检测试剂使用情况，黄：自配试剂，橙：FDA认证试剂1，蓝：FDA认证试剂2；（b）参评实验室检测方法使用情况，黄：实时荧光聚合酶链反应，橙：荧光分子杂交法，绿：焦磷酸测序法，蓝：Sanger双向测序法，紫芯片杂交法

2015年2次室间质评活动中，回报结果完全正确的实验室分别占93.75%（15/16）和88.24%（15/17）。成绩合格的实验室分别占93.75%（15/16）和100.00%（17/17），见表2。本研究还将2次室间质评中使用注册试剂和自配试剂检测的准确性进行了比对。使用厂家注册试剂检测在2次室间质评中成绩合格的实验室分别占100.00%和100.00%，而使用实验室自配试剂检测得满分的实验室分别为88.33%和100%。实验室总体检测能力和准确度有提高。

本项质评计划涉及CYP2C19 基因的3个位点（*2、*3和*17），本研究针对不同位点分析了不同检测方法的准确度。CYP2C19*2、*3和*17位点在2次室间质评中检测总符合率分别为95%和95%、100%和98.82%、98.82%和95%。第1次室间质评中，荧光聚合酶链反应法在3个位点的符合率分别为20%（1/5）、20%（1/5）和100%（5/5）；第2次室间质评中，Sanger测序法对*17位点的检测符合率仅为80%（12/15），总符合率为94.5%（52/55）。

表2 注册试剂和自配试剂质评成绩汇总 [实验室数（%）]

表3 各基因位点不同检测方法的检测符合率和总符合率 [%（实验室数）]

CYP2C19基因是氯吡格雷药物在人体内代谢和作用的关键酶，*2、*3和*17位点基因型差异能直接影响患者的给药剂量[3-5]。因此，其检测过程的质量保证工作十分重要。室间质评计划能够有效地监测实验室检测能力，发现日常检测工作中存在的问题，是质量保证的重要手段。

本研究通过氯吡格雷药物代谢基因检测室间质评计划对上海及其他地区临床实验室CYP2C19相关位点基因检测能力进行了评价，结果表明该项目的检测准确性整体水平较好，个别实验室的检测能力有待提高，这与国内外其他室间质评研究结果较一致[9-10]。2015年2次室间质评显示总体检测能力有提高，但是得满分的实验室分别占93.75%和88.24%，说明实验室的检测能力尚待进一步提高。

第1次室间质评中，参评实验室回报结果显示荧光聚合酶链反应的检测准确性最低，在*2和*3 2个位点的检测准确率均仅为20.00%。2个位点检测正确的样本结果应为杂合突变型，而检测错误的结果为野生型和纯和突变型。分析其错误原因为：（1）实验室使用了自配试剂，可能对自配试剂的检测性能事先没有进行充分的方法学确认。（2）可能为对报告位点结果解读的错误，或是实验室检测过程中出现错误，而又没有采取适当的质控措施，因此无法判断出错误的检测结果。我们认为可从上述几方面考虑，加强监管，提高检测质量。

Sanger双向测序法一直被认为是临床基因分型检测的“金标准”[12]。但我国目前尚无采用Sanger双向测序法检测CYP2C19基因位点分型的注册试剂，采用Sanger双向测序法进行检测的实验室均为实验室自配试剂。需要指出的是Sanger双向测序法检测总符合率为94.5%，其错误原因是将野生型样本检测为杂合突变型。这说明部分实验室自配试剂的检测性能存在差异，应对其检测性能进行充分论证，检测时注意做好质量控制工作。虽然Sanger双向测序法是公认的分型检测“金标准”，但临床检测实际中也会出现错误结果，“金标准”和检测准确度不存在必然联系，进一步说明不管采用何种检测方法都需要进行质量控制，一旦忽视了日常检测的质量控制，就可能导致错误检测结果的产生。建议实验室在开展实验室自建方法进行检测前应做好性能确认，在日常实验中做好室内质控。建议实验室采用无模板对照为阴性质控品并参与全部的扩增步骤，证实样本和试剂无核酸污染。阳性质控品应包括至少1个已知突变位点，可以采用基因型明确的患者留样样本或国际标准品。质控样本无需在每批检测中包括所有突变类型加入，只需加入1个已知突变位点的质控品，但最好有多个突变的质控品，并在日常检测中轮流使用。

同时，需要指出的是即使实验室采用注册试剂进行检测，也会出现错误的回报结果，分析其错误原因可能有实验操作上的失误和对检测结果的错误解读两方面，建议实验室应针对这两方面加强操作人员的培训。

近年来，随着药物基因组学的发展，越来越多的基因被发现参与药物人体代谢过程并用于相关药物临床用药指导。越来越多的临床实验室逐步开展相关药物基因分型检测项目，相关质量保证工作对于保证结果的准确性十分重要。希望通过室间质评项目的开展，帮助临床实验室及时发现检测中存在的问题，保证检测质量。

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参考文献：

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文章来源：超星期刊

作者：鲍 芸，肖艳群，蒋玲丽，王雪亮，杨依绡，王华梁

单位：上海市临床检验中心